Clustered Regularly-Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas9|CRISPR/Cas9
CRISPR / Cas9(聚簇有規律間隔的短回文重復序列/ Cas9)是一種細菌免疫系統,已經適應了哺乳動物細胞中的基因組編輯。 Cas9是一種可編程核酸酶,通過將一個約20個核苷酸的重組“引導RNA”(gRNA)與靶位點結合,在DNA中產生雙鏈斷裂(DSB)。 Cas9產生的DSB通常是通過該單元容易出錯的非同源末端連接(NHEJ)途徑修復的,從而導致了小的插入或缺失(indels)。絕大多數插入缺失會改變閱讀框,引入過早的終止密碼子或導致無意義的mRNA衰變,從而有效地“敲除”基因。CRISPR / Cas9系統在特定基因編輯方面已做出了巨大的努力,并已成功應用于修飾人類和其他生物的游離基因組。 CRISPR / Cas9系統利用原核RNA引導的可編程核酸酶,該酶可以在前導RNA的指導下在特定位點產生雙鏈DNA斷裂(DSB)。 DSB過程取決于兩個基本成分的共表達:指導RNA(gRNA)和Cas9核酸酶。制作特定的DSB可以通過容易出錯的非同源末端連接(NHEJ)或同源直接修復(HDR)觸發DNA修復。在存在CRISPR / Cas9系統的情況下,NHEJ抑制劑SCR7被證明可以在哺乳動物細胞中將Cas9介導的HDR的效率提高至少7倍。通過CRISPR / Cas9進行基因組編輯已成為對活細胞基因組進行精確,有針對性的改變的有效且可靠的方法。


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