鉛離子/鎘離子探針

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Leadmium Green dye
Leadmium Green AM 染料作為鉛或鉛的特定指示劑細(xì)胞中的鎘。 細(xì)胞加載染料后，非特異性酯酶裂解乙酰氧基甲基 (AM) 基團(tuán)，產(chǎn)生帶電形式的 Leadmium Green 染料泄漏細(xì)胞比母體化合物慢得多。 對鈣不敏感的 Leadmium™ Green 染料在存在納摩爾水平的鉛和微摩爾水平的鉛鎘。 這種染料可用于顯微鏡和流式細(xì)胞儀應(yīng)用。

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Leadmium green AM dye產(chǎn)品特點(diǎn)：
※ 用于細(xì)胞內(nèi)鉛和鎘含量測量的高度特異性指示劑
※ 靈活的形式允許用于多種檢測方式—流式細(xì)胞分析、熒光顯微鏡成像以及微孔板讀數(shù)儀
※ 明亮的熒光和對鈣的高分辨力，可檢測出納摩爾水平的鉛和微摩爾水平的鎘
※ 采用 488 nm 激光線輕松激發(fā)
※  Leadmium 綠色 AM 染料易于加載，在酯酶切割乙酰氧基甲基基團(tuán)后能很好地保留在細(xì)胞內(nèi)

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實(shí)驗(yàn)前試劑準(zhǔn)備
1.需要準(zhǔn)備但未提供的材料
※ PbCl2 溶液
※ CdCl2 溶液
※ 四-（2-吡啶基甲基）乙二胺（TPEN)
※ 乙醇
※ 離子霉素鈣鹽
※ 死細(xì)胞染色劑，例如碘化丙啶（1.0 mg/mL 水溶液）； SYTOX® Red 死細(xì)胞染料用于 633 或 635 nm 激發(fā)（5 µM 溶液在二甲基亞砜中）； 或用于流式細(xì)胞術(shù)的 SYTOX® Blue 死細(xì)胞染料（1 mM DMSO 溶液）
3.試劑準(zhǔn)備
3.1 從冰箱內(nèi)取出一管Leadmium™ Green AM dye（50 µg），讓其回溫到室溫，避光保存。
3.2 往管子內(nèi)加入50µl 高質(zhì)量無水的DMSO（Cat#：MS4601-100mL），避光混勻，使其充分溶解。
3.3 用生理鹽水按照1：10的比例將Leadmium™ Green AM dye的DMSO儲存液稀釋成工作液（比如取20µl 儲存液加到180µl生理鹽水，混勻），所有溶液制備過程一直避光。
3.4 37℃溫育生理鹽水，用于后續(xù)多個(gè)步驟的清洗過程。
3.5 【可選】如果此實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置相對對照（用已經(jīng)濃度的PbCl2處理細(xì)胞），建議PbCl2的起始濃度范圍是1nM-625nM。制備625nM PbCl2【添加250µl 10µM PbCl2到3.75ml生理鹽水。然后做9次連續(xù)性梯度稀釋最終得到1nM PbCl2】。37℃保存這些溶液直到需要。每個(gè)濃度需要1ml量。
3.6 【可選】如果此實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置相對對照（用已經(jīng)濃度的CdCl2處理細(xì)胞），建議CdCl2的起始濃度范圍是1µM-250µM。制備250µM CdCl2【添加1ml 1mM CdCl2到3ml生理鹽水。然后做8次連續(xù)性梯度稀釋最終得到1µM CdCl2】。37℃保存這些溶液直到需要。每個(gè)濃度需要1ml量。
3.7 【可選】制備10mM TPEN工作液，通過添加1.2ml無水乙醇到5mg TPEN。混勻，室溫保存。

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Figure 1. Background fluorescence of Leadmium™ Green dye in the Jurkat cell line. Cells in saline were loaded with Leadmium™ Green AM dye and washed. The singlecolor fluorescence was collected using 488 nm excitation and a 525/10 nm bandpass filter. Because no intracellular lead or cadmium was present in the cells, this histogram indicates the background fluorescence contributed by Leadmium™ Green dye.

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Figure 2. Fluorescence of Jurkat cells containing PbCl2 in the Jurkat cell line. Cells in saline were loaded with Leadmium™ Green AM dye and washed and then incubated in the presence of 1 µM PbCl2 in saline and 1 µM ionomycin. The single-color fluorescence was collected using 488 nm excitation and a 525/10 nm bandpass filter. The histogram shows cells positive for intracellular lead.

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