臺(tái)盼藍(lán)染色液

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一、0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液介紹：
※ 臺(tái)盼藍(lán)染色液: 又稱錐蟲藍(lán)染色液,用于細(xì)胞染色,細(xì)胞計(jì)數(shù)臺(tái)盼藍(lán)(Trypan blue)又稱錐藍(lán)或錐蟲藍(lán)等，分子式為C34H24N6Na4O14S4，分子量為960.81，CAS Number 72-57-1，是一種陰離子型染料。Trypan blue不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色，即產(chǎn)生所謂的拒染現(xiàn)象,而死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，可使染料通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使死細(xì)胞著色呈藍(lán)色，是生物實(shí)驗(yàn)中常用的檢測細(xì)胞活率的方法。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助臺(tái)盼藍(lán)染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中生物實(shí)驗(yàn)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。
※ 細(xì)胞膜完整性差異：活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透過性，能夠阻止臺(tái)盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，因此活細(xì)胞不被染色，呈無色透明狀。
※ 死細(xì)胞染色機(jī)制：死細(xì)胞或細(xì)胞膜受損的細(xì)胞，其細(xì)胞膜失去選擇透過性，臺(tái)盼藍(lán)染料可自由進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合，使細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色。
BIOFOUNT Trypan blue stain(1%)常用于檢測細(xì)胞膜的完整性以及細(xì)胞是否存活。活細(xì)胞不會(huì)被染成藍(lán)色，而死細(xì)胞會(huì)被染成淡藍(lán)色。臺(tái)盼藍(lán)可被巨噬細(xì)胞吞噬，故可用于巨噬細(xì)胞的活體染色劑。臺(tái)盼藍(lán)染色后，通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù)，就可以對細(xì)胞存活率進(jìn)行比較精確的定量，0.4%為常用的濃度。

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二、細(xì)胞染色注意事項(xiàng)
※ 染色特性：染色速度快，通常在室溫下孵育 1-5 分鐘即可完成染色，且染色結(jié)果直觀，易于通過顯微鏡觀察判斷。
※ 毒性：臺(tái)盼藍(lán)對細(xì)胞有一定毒性，染色后的細(xì)胞不宜繼續(xù)用于后續(xù)培養(yǎng)或功能實(shí)驗(yàn)，僅適用于一次性的活力檢測。
※ 穩(wěn)定性：0.4% 為常用工作濃度，該濃度下染液穩(wěn)定性較好，密封避光保存于 4℃環(huán)境中，可嘗試保存。

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三、臺(tái)盼藍(lán)染液的質(zhì)控
※ 外觀標(biāo)準(zhǔn)
顏色：深藍(lán)色澄清液體
無沉淀、無渾濁、無絮狀物
無肉眼可見顆粒雜質(zhì)
※ 濃度標(biāo)準(zhǔn)
臺(tái)盼藍(lán)含量：0.4%（w/v）± 0.02%
溶劑：0.85% NaCl 生理鹽水 / PBS（pH 7.2–7.4）
※ 理化指標(biāo)
pH：7.0–7.6
滲透壓：260–320 mOsm/kg（等滲，不造成細(xì)胞脹裂 / 皺縮）
過濾除菌：0.22 μm 濾膜過濾
內(nèi)毒素：≤0.5 EU/mL（細(xì)胞級(jí)必須）
※ 染色性能標(biāo)準(zhǔn)
染色清晰：死細(xì)胞呈均勻深藍(lán)，無雜染、無背景色
活細(xì)胞清晰透亮，無邊緣著色
不結(jié)晶、不聚團(tuán)，不干擾計(jì)數(shù)
染色時(shí)間寬容度好：3–10 min 內(nèi)結(jié)果穩(wěn)定。

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四、臺(tái)盼藍(lán)染液用途
※ 臺(tái)盼藍(lán)（Trypan Blue）是一種陰離子型重氮染料，不能穿過完整的活細(xì)胞膜。
細(xì)胞膜完整、有選擇性通透 → 染料無法進(jìn)入 → 細(xì)胞不著色、透亮。細(xì)胞膜完整、有選擇性通透 → 染料無法進(jìn)入 → 細(xì)胞不著色、透亮；
※ 光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)：總細(xì)胞數(shù)、活細(xì)胞數(shù)、死細(xì)胞數(shù)。計(jì)算：細(xì)胞存活率 = 活細(xì)胞數(shù) / 總細(xì)胞數(shù) × 100%；
適用：哺乳動(dòng)物細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞消化后、原代細(xì)胞等。

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